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Fibronectin Adhesion-promoting Peptide (Heparin Binding Peptide) 是一种肝素结合氨基酸序列,这段序列存在于纤连蛋白 C-端的肝素结合域中。Fibronectin Adhesion-promoting Peptide 促进间充质干细胞 (MSC) 球状体组装成更大的聚集体。Fibronectin Adhesion-promoting Peptide 通过与细胞的肝素结合区反应直接促进内皮细胞的粘附、扩散和迁移。

基本信息
  • 英文名称:Fibronectin Adhesion-Promoting Peptide (Heparin-Binding Peptide)
  • 中文名称:纤连蛋白黏附促进肽(肝素结合肽)
  • CAS 号:125720-21-0
  • 氨基酸序列:色氨酸 - 谷氨酰胺 - 脯氨酸 - 脯氨酸 - 精氨酸 - 丙氨酸 - 精氨酸 - 异亮氨酸
  • 单字母序列:WQPPRARI
  • 三字母序列:Trp-Gln-Pro-Pro-Arg-Ala-Arg-Ile
  • 氨基酸残基数:8 个
  • 分子式:C₄₇H₇₄N₁₆O₁₀
  • 分子量:1023.19 Da
  • 理论等电点:10.30,分子含有两个精氨酸强碱性残基,无酸性氨基酸,整体呈现强碱性理化特征
  • 来源:该八肽天然来源于人纤连蛋白的肝素结合功能结构域,是纤连蛋白经蛋白酶水解产生的活性片段;实验室普遍采用固相多肽合成技术制备,人工合成产物与天然片段的一级结构、空间构象及生物学活性完全一致。
  • 翻译后修饰:属于线性直链多肽,分子内不含半胱氨酸残基,不存在分子内及分子间二硫键;肽链两端为游离氨基与游离羧基,无 N 端乙酰化、C 端酰胺化末端修饰,同时无糖基化、磷酸化、硫酸化等侧链共价修饰;序列中的色氨酸兼具光敏性与氧化敏感性,易在光照、有氧环境下发生结构改变。
结构信息

该八肽在水溶液中以柔性无规卷曲为主体构象,序列中连续两个脯氨酸残基依靠环状侧链产生空间刚性约束,诱导肽链形成稳定的 β- 转角结构,固定功能区域的空间取向,是维持分子识别构象的重要骨架。分子整体呈现典型两亲性特征,可按功能划分为不同区段,N 端色氨酸与谷氨酰胺构成极性功能区,参与局部氢键作用与构象辅助稳定;中段连续脯氨酸为刚性骨架核心,保障整体空间形态;两个相邻精氨酸形成高密度正电荷区域,是特异性结合肝素、硫酸乙酰肝素等糖胺聚糖的关键位点;C 端丙氨酸与异亮氨酸属于疏水残基,可参与细胞膜疏水嵌合,辅助完成细胞黏附过程。

分子亲水性良好,在中性、弱碱性缓冲体系中不易自发聚集沉淀。色氨酸残基对紫外光、强光及活性氧敏感,易发生氧化与光降解,进而降低分子结合能力;强酸、强碱环境以及持续高温会逐步破坏肽键,造成肽链断裂、活性完全丧失。双脯氨酸形成的转角结构与双精氨酸正电区,是该多肽同时具备肝素结合活性与促细胞黏附活性的核心结构基础。

作用机理及研究进展

作用机理

该多肽兼具肝素结合与细胞黏附促进双重核心功能,作用模式区别于纤连蛋白经典 RGD 黏附肽。一方面,分子表面高密度正电荷区域可通过静电相互作用,特异性结合细胞外基质中的肝素、硫酸乙酰肝素等糖胺聚糖,介导纤连蛋白与胞外基质的交联,参与细胞外基质网络构建与重塑;另一方面,多肽可识别结合细胞膜表面整合素及相关黏附受体,启动下游信号通路,显著促进成纤维细胞、血管内皮细胞、平滑肌细胞等多种细胞的贴壁、铺展与定向迁移。

生理层面,该片段参与机体伤口愈合、组织修复、血管新生以及胚胎发育等生物学过程。体外实验中常作为标准化工具肽,用于肝素 - 蛋白相互作用分析、细胞黏附与迁移模型构建;同时可作为功能修饰单元,用于生物材料表面改性,提升材料的细胞相容性。该多肽不直接参与凝血、炎症通路调控,核心功能集中在细胞 - 基质相互作用领域。

研究进展

早期研究阶段,科研人员对人纤连蛋白进行酶解分段与活性筛选,成功分离得到该八肽,完成氨基酸序列解析与理化参数测定,初步证实其同时具备肝素结合能力与促细胞黏附活性,明确该区段是纤连蛋白发挥基质结合与细胞锚定功能的重要结构域,确立其在细胞生物学研究中的应用价值。

中期研究围绕构效关系与分子互作机制展开,通过氨基酸定点突变、残基替换实验,验证连续脯氨酸对空间构象的维持作用、双精氨酸对肝素结合的决定性作用,以及末端疏水残基对细胞黏附的辅助功能;借助表面等离子体共振、分子对接等技术,解析多肽与肝素、细胞膜受体的结合模式及动力学特征,分析 pH、离子强度对结合效率的影响,完善该多肽的结构 - 功能关联理论体系。

现阶段该多肽是细胞生物学、组织工程、生物材料领域的常用工具分子。基础研究中广泛用于整合素功能、细胞外基质互作、细胞迁移机制探索;应用领域常被用于组织工程支架、医用植入材料的表面功能修饰,改善材料细胞贴附能力;药物研发方面,利用其肝素靶向特性,将其作为靶向连接片段设计药物递送系统;同时也被用于筛选调控细胞黏附、基质结合的活性小分子化合物。

溶解保存

该多肽水溶性优异,可直接溶于无菌去离子水、pH 6.0~8.5 中性至弱碱性磷酸盐缓冲液、生理氯化钠溶液,常温条件下轻柔涡旋即可完全溶解,无需添加甲醇、二甲基亚砜等有机助溶剂。分子在中性、弱碱性环境中稳定性最佳,需避免在强酸性体系以及持续高温环境中长期存放,防止肽键水解失活。

序列含有氧化、光敏双重敏感的色氨酸残基,多肽配制、取样、实验操作及全程储存均需严格避光、隔氧处理,可根据实验需求添加低浓度抗氧化剂保护敏感位点;操作过程规避剧烈震荡,防止肽链局部转角结构被破坏。

真空冻干粉末密封后置于避光干燥环境,零下二十摄氏度条件下可长期稳定保存,长期种质留样建议存放于零下八十摄氏度低温环境。配制完成的多肽溶液按照单次实验用量独立分装,严格禁止反复冻融;四摄氏度避光条件下可短期存放一周,零下二十摄氏度密封避光储存可稳定维持二至三个月生物活性。经无菌过滤后的溶液,可直接用于细胞黏附实验、肝素结合分析、生物材料表面改性等科研场景。

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