【试剂简介】
线粒体DNA探针（Mito DNA-targeting Tracker，简称MTD）是一种专用于标记、追踪线粒体基因组的高选择性荧光探针试剂。该探针通过特异性结合线粒体DNA（mtDNA）上的靶标序列，实现对活细胞或固定细胞中线粒体DNA的精准定位与动态监测，广泛应用于线粒体生物学、细胞凋亡、衰老及代谢性疾病研究。
【试剂详情】
英文名称：Mito DNA-targeting Tracker，MTD
中文名称：线粒体DNA探针
CAS：不适用（定制合成试剂，无统一CAS编号）
分子式：视具体探针结构而定
分子量：视具体探针结构而定
溶解性：溶于部分有机溶剂，溶于水
规格：1g，5g，10g（可按需包装）
纯度：95%+
储存条件：干燥、避光，温度不超-20℃
注意事项：现配现用，不可频繁解冻
【分子构成与结构特点】
MTD探针分子通常由三部分组成：靶向识别基团、荧光报告基团与连接臂。靶向识别基团针对线粒体DNA保守序列设计，通常为短链寡核苷酸或小分子配体，能够高亲和力结合mtDNA特定区域（如D-loop区）。荧光报告基团采用耐光漂白、量子产率高的染料（如Cy5、Alexa Fluor系列），确保在复杂细胞环境中稳定发光。连接臂长度与柔韧性经过优化，确保靶向基团与荧光基团之间空间构象合理，减少空间位阻对结合效率的影响。整体结构设计保证了探针对线粒体DNA的高选择性，而对核DNA和RNA结合能力极低。
【主要应用领域】
1. 线粒体基因组成像与定位：在活细胞或固定细胞中，MTD可实时显示线粒体DNA的亚细胞分布，辅助研究线粒体微结构、动态变化及与细胞核的互作。
2. 线粒体功能障碍研究：在氧化应激、药物处理或衰老模型中，MTD可用于监测mtDNA拷贝数变化、损伤累积及修复过程，为线粒体相关疾病机制提供直接证据。
3. 细胞凋亡与自噬研究：MTD结合其他标记探针，可同步观察线粒体膜电位变化、线粒体自噬过程中mtDNA的降解与释放。
4. 药物筛选与毒性评价：利用MTD评估候选化合物对线粒体基因组完整性的影响，作为药物毒理学早期筛选指标之一。
【操作规范与储存条件】
1. 储存规范：MTD探针以干粉或浓缩液形式提供。干粉需在-20℃以下密封干燥避光保存；浓缩液分装后同样避光冷冻，避免反复冻融。取用时应在冰上操作，使用无水乙醇或DMSO（质量级）溶解至母液浓度（建议1 mM），母液在4℃避光可短期存放3天。
2. 细胞染色操作：贴壁或悬浮细胞染色前需用预温的PBS（pH 7.4）清洗3次。MTD工作液浓度建议为100 nM–1 μM，具体浓度需根据细胞类型和实验目的进行预实验优化。探针与细胞在37℃、5% CO₂条件下共孵育30–60分钟。染色结束后，用PBS清洗3次，每次5分钟，去除未结合的探针。
3. 荧光检测：染色后细胞可使用共聚焦显微镜或高分辨率荧光显微镜检测。激发波长依据所用荧光基团设定（如Cy5激发/发射：649/670 nm），建议使用低激光功率以减少光漂白。实时动态成像建议间隔30秒，连续拍摄不超过15分钟。
4. 常见问题排查：染色背景过高时线粒体DNA探针(Mito DNA-targeting Tracker,MTD），缩短孵育时间或增加清洗次数；点状非特异性信号明显时，建议加入0.1% Triton X-100进行透化处理（适用于固定细胞）；信号弱或无信号时，检查母液浓度是否准确、探针是否降解（肉眼观察有无沉淀或颜色变化），并适当延长激发光采集时间。
【有关试剂】
MitoTracker Red CMXRos（线粒体膜电位探针）
MitoTracker Green FM（线粒体膜电位探针）
LysoTracker Red DND-99（溶酶体探针）
Hoechst 33342（核DNA染料）
DAPI（核DNA染料）
JC-1（线粒体膜电位比率探针）
TMRM（四甲基罗丹明甲酯，线粒体膜电位探针）
Rhodamine 123（线粒体膜电位探针）
注：该试剂仅用于科学研究，不能用于人体实验或其他治疗型用途。
本文试剂资料由小华编辑整理。
