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楚肽生物Apeptide(楚肽生物底物Boc-Gln-Arg-Arg-pNA价格) ypxx.net

基本信息

英文名称：Human CMV Assemblin Protease Substrate (R-site)
中文名称：人巨细胞病毒组装蛋白酶底物（R 位点）
CAS 号：该人工合成病毒蛋白酶特异性底物暂无公开收录的 CAS 登记号
氨基酸序列：丝氨酸 - 酪氨酸 - 缬氨酸 - 赖氨酸 - 丙氨酸 - 丝氨酸 - 缬氨酸 - 丝氨酸 - 脯氨酸 - 谷氨酸
单字母序列：SYVKASVSPE
三字母序列：Ser-Tyr-Val-Lys-Ala-Ser-Val-Ser-Pro-Glu
氨基酸残基数：10 个
分子式：C₄₇H₇₅N₁₁O₁₇
分子量：1066.16 Da
理论等电点：约 6.65，分子含 1 个赖氨酸碱性残基与 1 个谷氨酸酸性残基，正负电荷基本抵消，整体接近中性。
来源：该十肽为人工设计合成的疱疹病毒丝氨酸蛋白酶特异性底物，序列完全复刻人巨细胞病毒衣壳组装蛋白前体上的天然 R 位点切割序列，是 CMV 组装蛋白酶体外酶活定量、动力学表征与抑制剂筛选的标准工具底物。实验室采用固相多肽合成技术制备，合成产物与病毒天然酶切位点的一级结构、酶识别特异性及切割效率完全一致。
翻译后修饰：线性直链多肽，分子内不含半胱氨酸、甲硫氨酸等含硫氨基酸，不存在分子内及分子间二硫键交联；N 端与 C 端均为游离末端，无 N 端乙酰化、C 端酰胺化、磷酸化、糖基化、硫酸化等共价修饰。序列含有酪氨酸一种光敏芳香氨基酸，紫外照射下芳香环易发生氧化损伤；赖氨酸为碱性带电残基，谷氨酸为酸性带电残基，丝氨酸为极性亲水残基，脯氨酸为构象刚性残基，上述残基的解离状态与空间构象会随环境 pH 发生改变；常温中性条件下多肽主链肽键骨架化学性质稳定。

结构信息

该多肽在纯水及常规缓冲体系中主要以无规卷曲构象存在，序列第 9 位脯氨酸残基产生空间位阻，诱导下游肽段形成局部 β- 转角结构，整体兼具柔性与局部刚性，可精准适配 CMV 组装蛋白酶的裂隙型活性口袋。依据酶识别与切割功能可划分为两个功能区段，上游 1～5 位为底物识别锚定区，酪氨酸疏水侧链、赖氨酸正电荷分别与酶的 S2、S1 亚口袋形成疏水相互作用与静电吸附，第 5 位丙氨酸为 P1 位点，是酶活性中心的核心识别残基，决定底物的结合特异性；下游 6～10 位为切割与构象稳定区，第 6 位丝氨酸为 P1' 位点，与 P1 丙氨酸共同构成 Ala-Ser 专一性切割位点，下游缬氨酸、丝氨酸、脯氨酸依次匹配酶的 S1'、S2'、S3' 亚结合口袋，脯氨酸固定下游肽段空间取向，谷氨酸调节局部电荷平衡，共同保障底物结合的亲和力与催化效率。

分子内亲水极性残基、带电残基与疏水残基交错分布，在 pH 5.0～9.0 宽范围缓冲体系中水溶性良好，无自发聚集沉淀现象。紫外光照会氧化酪氨酸残基，破坏底物上游识别位点，导致酶结合能力与切割效率显著下降；环境 pH 剧烈波动会改变赖氨酸与谷氨酸的解离状态，扰乱静电相互作用网络；长时间接触强酸、强碱或持续高温会引发非特异性肽键水解，造成多肽降解失活；脯氨酸维系的局部转角结构稳定性较强，常规混匀、震荡操作不会改变底物的功能构象与酶切特性。

作用机理及研究进展

作用机理

人巨细胞病毒组装蛋白酶属于丝氨酸蛋白酶家族，是病毒复制周期中衣壳成熟阶段的必需关键酶，可特异性切割衣壳蛋白前体与组装蛋白前体，驱动病毒衣壳的构象成熟与基因组包装，无功能蛋白酶则无法形成具有感染性的子代病毒颗粒。该 R 位点底物可特异性嵌入 CMV 组装蛋白酶的活性中心裂隙，上下游氨基酸残基分别与酶的两侧亚结合口袋精准互补，酶活性中心的丝氨酸残基亲核攻击 Ala-Ser 之间的肽键，完成底物的水解切割。通过高效液相色谱、质谱或荧光衍生法定量检测底物消耗量或酶切产物生成量，即可精准测定蛋白酶的催化活性与动力学参数；加入候选抑制剂后，通过酶切反应速率的变化可定量评价化合物的抑制效力、IC₅₀等药效参数。该底物对 CMV 组装蛋白酶识别特异性高，与人源同源蛋白酶及其他疱疹病毒蛋白酶交叉反应极低，检测背景干扰小。

该多肽为线性酶底物，口服后易被消化道普通蛋白酶快速降解，仅适用于体外生化酶活检测体系，无法体内给药；可直接溶于酶反应缓冲液构建标准化体外筛选与评价体系。

研究进展

早期研究通过解析人巨细胞病毒基因组与病毒衣壳成熟通路，鉴定出组装蛋白酶及其多个天然切割位点，设计并合成包含 R 位点在内的系列多肽底物，验证各底物的酶切效率与特异性，确立 R 位点为常用的标准检测底物之一；建立基于反相高效液相色谱的体外酶活检测方法，完成基础反应条件的初步优化。

中期研究借助定点氨基酸替换技术，系统解析 P1、P1' 及上下游各残基对底物结合亲和力、切割效率与特异性的贡献；利用 X 射线晶体学技术解析底物 - 蛋白酶复合物的三维结构，阐明 CMV 组装蛋白酶的底物识别分子机制与催化机理；系统评价 pH、温度、离子强度、光照对底物稳定性及酶切反应的影响，标准化体外酶活检测的反应体系与操作流程。

现阶段该底物是抗巨细胞病毒药物研发、病毒分子生物学研究领域的常用工具试剂。基础研究中用于测定 CMV 组装蛋白酶的 Km、Vmax 等动力学参数、解析酶催化机制、研究临床耐药突变体的功能变化；药物研发领域用于小分子蛋白酶抑制剂的高通量筛选、先导化合物的活性评价与结构优化；同时也用于不同疱疹病毒组装蛋白酶的底物特异性比对与功能进化分析。

溶解保存

该多肽水溶性良好，常温轻柔混匀即可完全溶解于无菌纯水、pH 5.0～9.0 磷酸盐缓冲液、Tris-HCl 酶反应缓冲液，无需甲醇、二甲基亚砜等有机溶剂辅助溶解，中性至弱碱性缓冲体系为最优反应环境，需长期规避强酸碱环境与持续高温。

序列含有光敏酪氨酸残基，在多肽配制、取样、实验操作及全程储存过程中必须严格避光；分子不含易氧化含硫残基，有氧环境下结构稳定，无需额外隔绝氧气与添加还原剂。

真空冻干粉末采用密封避光方式存放，常规长期储存温度设置为 - 20℃，标准种质留样优选 - 80℃环境；多肽水溶液按照单次实验用量独立分装，严格禁止反复冻融操作；4℃避光条件下可短期稳定存放 7～10 天，-20℃避光密封环境下可稳定保存 3 个月。经过无菌过滤后的多肽溶液，可直接用于体外酶活测定、抑制剂筛选、酶动力学参数表征等实验。

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