Texas Red Tomato LectinTexas Red番茄凝集素理化性质与实验应用指南 ypxx.net

Texas Red® Tomato Lectin

英文名称:Texas Red Concanavalin A (ConA)

CAS号:126598-08-3

分子式:C59H82N12O10 (标记部分)

分子量:约 430 Da (Texas Red X 酰氯部分)

规格:1 mg / 5 mg

纯度:≥ 95% (通过HPLC测定)

试剂来源:强化生物

一、分子结构与基本组成

该试剂由刀豆球蛋白A(Concanavalin A, ConA)与Texas Red X荧光染料偶联而成。ConA是一种来源于刀豆(Canavalia ensiformis)的植物凝集素,分子量约为104 kDa,具有四个相同的亚基,每个亚基包含一个金属离子结合位点。Texas Red X是一种磺基黄荧光团,具有较大的斯托克斯位移和良好的光稳定性。偶联反应通常发生在ConA的赖氨酸残基上,形成稳定的酰胺键。Texas Red Tomato Lectin保留了ConA对糖类结构的特异性识别能力,同时引入了荧光标记以便进行可视化检测。

二、主要理化性质

ConA特异性结合α-D-甘露糖和α-D-葡萄糖残基。其等电点约为pH 5.0-5.2,在生理pH条件下带负电荷。Texas Red X的最大激发波长约为596 nm,最大发射波长约为620 nm。该试剂溶于水及缓冲液,但在高浓度盐溶液中可能因ConA的多聚化倾向而发生沉淀。溶解后溶液呈深红色,需在避光条件下保存以防止荧光淬灭。其结合常数(Ka)对于甲基α-D-甘露糖苷约为2.5×10^4 M^-1。

三、常见应用场景

1. 细胞表面糖蛋白染色:利用其对细胞膜表面甘露糖和葡萄糖残基的亲和力,标记内皮细胞、白细胞等富含此类糖蛋白的细胞类型。

2. 组织切片免疫组化辅助标记:在多重荧光标记实验中,作为红色通道探针Texas Red® Tomato Lectin,与绿色或蓝色荧光探针配合使用。

3. 糖生物学研究:用于竞争性结合实验,评估细胞表面糖链分布及密度,常与荧光标记的凝集素阵列技术结合使用。

四、储存条件与稳定性

原粉建议在-20°C干燥避光保存,有效期通常为12个月。重溶后建议分装,并在-20°C或-80°C保存,避免反复冻融。工作液应在4°C避光保存,并建议在24小时内使用完毕以保证信号强度。冷冻保存的溶液使用前需缓慢解冻至室温,避免剧烈震荡产生气泡影响荧光检测。

五、操作注意事项

使用前需确认缓冲液中不含钙、镁、锰等离子,因为ConA的结合活性依赖于这些二价阳离子,但若使用含EDTA的缓冲液,需额外补充MnCl2或CaCl2至适当浓度(通常1-5 mM)。操作中应佩戴手套和护目镜,避免皮肤直接接触高浓度荧光染料。废液需按照有害化学废物处理,不可直接倒入下水道。

六、常见问题及处理建议

若出现非特异性背景染色,可能是由于ConA浓度过高或封闭不充分。建议增加牛血清白蛋白(BSA)或脱脂奶粉的封闭时间,并优化洗涤步骤。若荧光信号弱,检查激发光源功率及滤光片匹配度,确保使用适合Texas Red的激发/发射滤片组合。

七、其它有关试剂

1. FITC-Concanavalin A

2. Alexa Fluor 488 ConA

3. Alexa Fluor 594 ConA

4. Alexa Fluor 647 ConA

5. Cy3 Concanavalin A

6. DyLight 550 ConA

7. DyLight 633 ConA

8. Rhodamine Concanavalin A

9. Biotin-Concanavalin A

10. HRP-Concanavalin A

11. Texas Red WGA (小麦胚芽凝集素)

12. FITC-WGA

13. Alexa Fluor 405 Wheat Germ Agglutinin

14. PE-Lectin

15. APC-Lectin

16. TRITC-ConA

17. Cyanine 5 Concanavalin A

18. Oregon Green 488 ConA

19. Pacific Blue ConA

20. Zonagen Lectin Panel

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