pp60 c-src (521–533) (phosphorylated)；磷酸化 pp60 c-src (521–533) 多肽|科技 |pp |基团 |蛋白 |csrc |序列

pp60 c-src (521–533) (phosphorylated)；磷酸化 pp60 c-src (521–533) 多肽 ypxx.net

基本信息

英文名称：pp60 c-src (521–533) (phosphorylated)
中文名称：磷酸化 pp60 c-src (521–533) 多肽
三字母氨基酸序列：Thr-Ser-Thr-Glu-Pro-Gln-Tyr (PO₃H₂)-Gln-Pro-Gly-Glu-Asn-Leu
单字母氨基酸序列：TSTEPQpYQPGENL
CAS 号：149299-77-4
分子式：C₆₂H₉₅N₁₆O₂₈P
精确分子量：1543.50
理论等电点 pI：3.91
残基总数：13；
修饰信息：Tyr⁷位发生单磷酸化修饰；无 N 端乙酰化、无 C 端酰胺化；序列不含半胱氨酸，不存在二硫键；无其他翻译后修饰。理化特征：多肽强酸性，磷酸基团进一步增加负电荷，pH7.4 水溶液携带大量负电荷；水溶性优异，适宜在中性、弱酸性缓冲体系溶解；酪氨酸磷酸化位点易发生脱磷酸降解；266 nm 存在特征紫外吸收，可用于定量检测。

结构信息

该多肽为天然 c-Src C 端调控序列磷酸化形式，线性柔性多肽，溶液中主要呈现无规卷曲构象，无稳定 α 螺旋与 β 折叠结构。序列中 Pro⁵、Pro¹0 两处脯氨酸残基诱导肽链局部弯折，塑造适配 SH2 结构域结合沟槽的空间构型。磷酸修饰的酪氨酸残基 pTyr 是核心功能位点，磷酸基团带有高密度负电荷，能够与 Src 家族 SH2 结构域内部高度保守的精氨酸残基形成强离子键，周边极性氨基酸协同构建氢键网络，稳定蛋白 - 多肽复合物。与非磷酸化同源多肽对比，单磷酸基团引入直接赋予多肽与 SH2 结构域高亲和力结合能力；去除磷酸基团后，相互作用急剧减弱。完整肽链长度、脯氨酸位置、pTyr 位点三者共同决定结合特异性，单点突变或截短均显著降低结合活性。

作用机理

多肽无酪氨酸激酶催化活性，核心功能是作为 Src SH2 结构域高亲和力配体。内源生理层面模拟活化 Csk 激酶催化后的 c-Src C 端状态，磷酸化 Tyr527 与分子内 SH2 结构域结合，促使 c-Src 维持闭合自抑制构象，封闭激酶催化口袋，阻断底物结合，抑制激酶活化。体外实验体系中，该多肽可作为竞争性拮抗剂，游离结合胞内或重组 Src 家族 SH2 结构域，竞争性阻断磷酸化靶蛋白与 SH2 结构域相互作用，下调 Ras-MAPK、PI3K/Akt、FAK 信号轴，抑制细胞骨架重构、肿瘤细胞迁移侵袭。生化应用上，常作为标准探针用于表面等离子体共振、微量热泳动、共沉淀实验，定量测定 SH2 结合亲和力，用于 SH2 靶向小分子、多肽抑制剂高通量筛选；同时可作为阳性对照多肽，区分磷酸依赖型蛋白相互作用。

研究进展

该多肽自上世纪 90 年代成为解析 c-Src 自抑制机制不可或缺的工具试剂。早期利用该磷酸化多肽体外重构自抑制复合物，直接证实 pTyr527 介导分子内 SH2 结合，确立 Src 激酶经典自抑制模型，为理解全部 Src 家族激酶调控机制提供关键依据。随后广泛用于 SH2 结构域结合谱分析，建立磷酸肽识别基序数据库。肿瘤药理学方向，借助细胞穿透肽融合修饰的磷酸化多肽开展胞内干预实验，证实可以抑制多种实体瘤 Src 介导的转移表型。构效关系研究基于该骨架改造磷酸酪氨酸模拟物、环化类似物，开发耐受磷酸酶水解的稳定衍生物。近年来常将多肽偶联生物素、荧光基团制备生物探针，用于蛋白复合物捕获、活细胞成像研究。该多肽主要局限在于：极易被胞内蛋白酪氨酸磷酸酶催化脱磷酸而失活；天然线性结构易被蛋白酶水解；缺乏细胞膜穿透能力，未修饰多肽仅适用于体外生化实验。当前优化策略包括非水解型磷酸酪氨酸类似物替换、D 型氨基酸改造、环化、纳米载体递送等，提升稳定性与胞内利用效率。

溶解与保存

溶解：优先使用无菌超纯水、pH 6.0–7.2 PBS、醋酸铵缓冲液溶解；避免强碱环境，碱性条件加速脱磷酸化。溶解速度偏慢时可温和加温至 30–35 ℃，禁止长时间煮沸。体系减少金属离子，金属离子会加速磷酸基团水解。
短期保存：多肽溶液 4 ℃避光可稳定保存 1～2 天；全程避光，降低磷酸酪氨酸氧化降解风险。
长期保存：冻干粉末密封避光−20 ℃储存；配制工作液分装小体积，−80 ℃冻存，严格杜绝反复冻融。