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(Casein Kinase-2 substrate) ;RRREETEEE(casein protein) ypxx.net

基本信息

中文名称：酪蛋白激酶 2 底物；精 - 精 - 谷 - 谷 - 谷 - 苏 - 谷 - 谷 - 谷
三字母序列：Arg-Arg-Glu-Glu-Glu-Thr-Glu-Glu-Glu
单字母序列：RRREETEEE
分子式：C46H75N15O23
分子量：1206.19
结构特征：九肽，线性多肽，无 N 端乙酰化、C 端酰胺化修饰；无 D 型氨基酸，不含半胱氨酸残基，无巯基、二硫键，无荧光、生物素标记。氨基酸依次为 Arg、Arg、Glu、Glu、Glu、Thr、Glu、Glu、Glu。磷酸化位点：第 6 位 Thr，是 CK2（Casein Kinase 2，酪蛋白激酶 2）识别催化的苏氨酸残基，Thr 侧链羟基接受 ATP 的 γ 磷酸基团。
结构式：

基本性质

经典 CK2 体外多肽底物。序列富含酸性谷氨酸残基，N 端带两个碱性精氨酸，整体净电荷偏负，水溶性优异，易溶于水、中性缓冲溶液，难溶于纯有机溶剂。分子不含 Cys，不存在巯基氧化、二聚风险，氧化稳定性优于含半胱氨酸多肽。粉末具备吸湿性；水溶液可被肽酶缓慢水解，高温、强碱性条件会加速肽键断裂。理论等电点偏酸性。

作用机理

CK2 是一种保守的丝氨酸 / 苏氨酸蛋白激酶，广泛存在于真核细胞，组成型激活，不依赖第二信使激活，这点和 PKA、PKG 有明显区别。CK2 识别底物的特征偏好：磷酸化位点残基的C 端侧紧邻酸性氨基酸（Asp/Glu），这也是该底物设计的核心原理。本底物 RRREETEEE，Thr 位点的下游连续多个 Glu 残基，完美匹配 CK2 的底物结合口袋偏好。CK2 催化 ATP 上磷酸基团转移至 Thr 侧羟基，生成磷酸化多肽。磷酸化后分子负电荷进一步增加。可采用 ³²P 同位素掺入、HPLC、毛细管电泳、质谱或者磷酸特异性检测手段定量磷酸产物。

应用领域

科研工具肽，仅限体外生化实验，不可用于人体给药或临床诊断。

CK2 体外酶活测定：重组酪蛋白激酶 2 活性定量，是文献里高频使用的标准底物肽。
CK2 抑制剂高通量筛选：评估小分子化合物对 CK2 催化活性的抑制效果，计算 IC50、Ki 等抑制参数。
酶动力学参数测定：测定 Km、kcat，研究 CK2 的底物识别、结合口袋的氨基酸偏好。
激酶选择性评估：与 PKA、PKG、PKC 等其他激酶底物平行对照，用来评估抑制剂对 CK2 的选择性。
LC-MS 方法开发：作为标准底物，建立磷酸化多肽的质谱检测方法。

药物研发

CK2 参与细胞增殖、DNA 修复、凋亡调控、炎症和肿瘤信号通路，在多种肿瘤中高表达，是抗肿瘤、抗炎的热门靶点。该多肽本身不是药物，仅作为生化筛选工具。利用该底物建立体外生化筛选体系，寻找 CK2 小分子抑制剂。多个 CK2 抑制剂已经进入临床前和早期临床研究，用于肿瘤相关研究。多肽本身极性强，细胞膜穿透能力弱，体内易被肽酶快速降解，不适合直接作为治疗药物。

研究进展

RRREETEEE 是人工设计的优化 CK2 底物，基于天然 CK2 底物的保守酸性基序改造而来。构效关系研究证实：Thr 羧基侧连续多个 Glu 是高亲和力识别关键；如果把 Thr 突变成 Ala，激酶完全不能磷酸化；减少 Thr 下游 Glu 的数量，催化效率显著下降。该底物常和 CK2 的 Ser 型底物做对比，用来研究 CK2 对 Ser/Thr 残基的底物偏好差异。CK2 的独特酸性残基识别规则，也是激酶研究里经典例子。